Заглавие с экрана

[Библиогр.: 23 назв.]

Т-лимфобластоподобные лейкозные клетки человека линии Jurkat (Jurkat-T-клетки) образуют в суспензионной культуре полиплоидные формы с повышенным содержанием ДНК. Это способствует, вследствие выраженной генетической нестабильности, дальнейшей трансформации и развитию клонального разнообразия (поликлоновости) клеточной линии. Об адгезирующей субпопуляции Jurkat-T-клеток сведения немногочисленны. В настоящей работе анализировали содержание нуклеиновых кислот в суспензионной (ДНК) и адгезионной (ДНК, РНК) субпопуляциях Jurkat-T-клеток с использованием проточной цитометрии и красителя иодида пропидия, а также конфокальной лазерной микроскопии и красителя акридинового оранжевого. Морфологию и подвижность крупных (с диаметром более 15 мкм) прикрепившихся к пластику Jurkat-T-клеток изучали с использованием Cell-IQ фазово-контрастной микроскопии в реальном времени. По интенсивности флюоресценции в условно зеленом диапазоне длин волн (300-530 нм: от УФ до зеленого) и в условно красном (565-800 нм: от красного до дальнего красного) выделили 3 субпопуляции адгезирующих Jurkat-Т-клеток: с высоким, средним, и низким содержанием нуклеиновых кислот. Таким образом, Jurkat Т-клетки, адгезирующие к пластиковой поверхности планшетов, сохраняют выраженную гетерогенность в содержании ДНК, характерную для суспензионной фракции, что предполагает различие морфофункциональных свойств (поликлоновость) данной субпопуляции клеточной культуры. При резком нарастании общей клеточной массы доля крупных (гигантских; 15-50 и более мкм) клеток, прикрепившихся к пластику, на протяжении 21 сут культивирования оставалась постоянной и составляла 1% адгезирующей фракции.

Установлено, что крупные Jurkat-Т-клетки (медианное значение диаметра 31 мкм) передвигались по пластику с линейной (по медиане) скоростью 38 мкм/ч. Морфологически идентифицируется полинуклеарность Jurkat-Т-клеток на пластике; выявлен линейный рост подвижности адгезирующих клеток с увеличением их диаметра (коэффициент регресcии r = 0.33; p < 0.02; n = 52). Обсуждаются возможные клеточно-молекулярные механизмы повышенного числа копий ДНК в части адгезирующих Jurkat-Т-клеток. Предполагается, что обнаруженное новое свойство (двигательная активность) может обеспечивать полиплоидным (многоядерным) адгезирующим Jurkat-T-клеткам существенное преимущество направленной миграции (хемотаксиса) в растущей клеточной популяции в условиях недостатка нутриентов, обусловленного сменой питательной среды через 3-4 сут культивирования.

T-lymphoblast-like human leukemia cells of the Jurkat line (Jurkat T cells) form polyploid forms with an increased DNA content in suspension culture. This promotes, due to pronounced genetic instability, further transformation and development of clonal diversity (polyclonal) of the cell line. Little information is available on the adherent subpopulation of Jurkat T cells. In this work, we analyzed the content of nucleic acids in suspension (DNA) and adhesion (DNA, RNA) subpopulations of Jurkat T cells using flow cytometry (dye - propidium iodide) and confocal laser microscopy (dye - acridine orange), respectively. The morphology and mobility of large (more than 15 μm in diameter) adherent Jurkat T cells were studied using Cell-IQ real-time phase contrast microscopy. According to the fluorescence intensity in the conditionally green wavelength range (300-530 nm: from UV to green) and conditionally red (565-800 nm: from red to far red), 3 subpopulations of adherent Jurkat T cells were identified: with high, medium, and low nucleic acid content. Thus, Jurkat T cells adhering to the plastic surface of the plates retain the pronounced heterogeneity in the DNA content characteristic of the suspension fraction, which suggests a difference in the morphofunctional properties (polyclonicity) of this subpopulation of cell culture. With a sharp increase in the total cell mass, the proportion of large (giant) (15-50 μm or more) cells attached to the plastic remained constant for 21 days of cultivation and amounted to 1% of the adhesion fraction.

It was found that large Jurkat T cells (median diameter 31 μm) moved along the plastic with a linear (along the median) speed of 38 μm/h. Polynuclearity of Jurkat T cells into plastic ones is morphologically identified; a linear growth (regression coefficient r = 0.33; p < 0.02; n = 52) of the mobility of adherent cells with an increase in their diameter was revealed. Possible cellular and molecular mechanisms of an increased number of DNA copies in the part of adherent Jurkat T cells are discussed. It is assumed that the discovered new property (locomotor activity) can provide polyploid/multinucleated adherent Jurkat T cells with a significant advantage of directed migration (chemotaxis) in a growing cell population under conditions of nutrient deficiency caused by a change in the nutrient medium after 3-4 days of cultivation.