000 10132nam1a2200565 4500
001 667968
005 20231030042133.0
035 _a(RuTPU)RU\TPU\network\39179
035 _aRU\TPU\network\39135
090 _a667968
100 _a20220519a2021 k y0rusy50 ca
101 0 _arus
102 _aRU
135 _adrcn ---uucaa
181 0 _ai
182 0 _ab
200 1 _aЗначение выбора питательной среды для результатов длительного in vitro культивирования лейкозных T-лимфобластов
_dSignificance of nutrient media choice for the long-term cultures of leukemic T-lymphoblasts
_fЛ. С. Литвинова, К. А. Юрова, В. В. Шуплецова [и др.]
203 _aТекст
_cэлектронный
300 _aЗаглавие с экрана
320 _a[Библиогр.: 28 назв.]
330 _aПравильный выбор питательных сред для культивирования различных видов клеток в разнообразных приложениях является одним из важнейших аспектов современных биотехнологий, поскольку химический состав культуральных сред во многом воспроизводит необходимые метаболиты для поддержания роста определённых линий клеток вне организма. Jurkat линия лейкозных Т-лимфобластоподобных клеток человека (далее Jurkat T-клетки) активно используется для in vitro моделирования внутриклеточного сигналинга и активации нормальных Т-лимфоцитов крови, опосредованной комплексом T-клеточный рецептор/CD3/CD4, в токсикологических исследованиях иммунных и секреторных реакций на лекарственные вещества и ионы. Кроме того, Jurkat T-клетки широко применяются для ex vivo тестирования в области иммунологии, онкологии, токсикологии, ортопедии и травматологии. Существующие стандарты и многочисленные исследования основаны преимущественно на краткосрочном in vitro культивировании Jurkat T-клеток в питательной среде RPMI 1640. Вместе с тем вопросы длительного обеспечения роста культуры Jurkat T-клеток слабо представлены в научной литературе.
330 _aЦелью данного исследования явилось изучение активности Jurkat T-клеток в 7-14-суточной культуре in vitro и сравнительная оценка значения RPMI 1640 и αMEM для поведения иммунокомпетентных опухолевых клеток. С помощью проточной цитофлуориметрии, мультиплексного анализа и фазово-контрастной Cell-IQ микроскопии изучены доли живых и погибших клеток путем апоптоза и некроза, секреция цитокинов и хемокинов, динамика накопления клеточной биомассы. Установлено, что среда αМЕМ в составе полной питательной среды, в сравнении с RPMI 1640, в большей мере способствует in vitro поддержанию жизнеспособности (увеличение доли живых клеток на 13,5% к 14-м суткам), секреторной способности в отношении 23 из 27 тестируемых биомолекул, сокращению (на 32%) времени адаптации клеток к условиям культивирования перед пролиферацией, 5-кратному приросту клеточности культуры Jurkat Т-клеток к 7-м суткам. Обсуждается потенциальное значение химических компонентов питательных сред и секретируемых биомолекул для полученных результатов. На основании полученных результатов сделано заключение о более оптимальных свойствах среды αМЕМ для длительного in vitro культивирования Jurkat Т-клеток. Как следствие, тестирование in vitro медицинских изделий, предназначенных для долговременного контакта с организмом, в том числе у онкологических больных, на лейкозной линии Jurkat Т-клеток в среде RPMI 1640 могут обусловить ошибочный прогноз их биосовместимости и потенциальной противоопухолевой активности.
330 _aCorrect choice of nutrient media for culturing different types of cells in various applications is one of the most important aspects of modern biotechnology, since chemical composition of the culture media largely contains the necessary metabolites to support certain cells' growth lines outside the body. Jurkat line of human leukemic T-lymphoblast-like cells (hereinafter Jurkat T-cells) is actively used for in vitro modeling of intracellular signaling and activation of normal blood T-lymphocytes mediated by the T-cell receptor/CD3/ CD4 complex in toxicological studies of immune and secretory responses, to test medicinal substances and ions. Also, Jurkat T-cells are widely used for ex vivo testing in immunology, oncology, toxicology, orthopedics, and traumatology. The existing standards and numerous studies are mainly based on short-term in vitro cultivation of Jurkat T-cells in RPMI 1640 nutrient medium. Meanwhile, the issues of long-term maintenance of the growth of Jurkat T-cells culture are poorly presented in the research literature
330 _aThis study aimed for studying the activity of Jurkat T-cells over 7 to 14 days of in vitro culture and comparing the relative value of RPMI 1640 and αMEM media for the behavior of immunocompetent tumor cells. Using flow cytometry, multiplex analysis, and phase contrast Cell-IQ microscopy, the proportions of living cells and those dying by apoptosis and necrosis, secretion of cytokines and chemokines, and the dynamics of cell biomass propagation were studied. It was found that the αMEM medium in the complete nutrient medium, as compared with RPMI 1640, is more appropriate to in vitro promotion of cell viability (increased proportion of viable cells by 13.5% at the day 14), their secretory ability for 23 из 27 tested biomolecules, shortened adaptation time (на 32%) in culture before growth initiation, 5-fold increase of the Jurkat Т-cell cellularity by the day 7. Potential significance of the chemical components of nutrient media and secreted biomolecules for these results is discussed. As based on the results obtained, we concluded on superior properties of αMEM medium for long-term in vitro cultures of Jurkat T-cells. Consequently, the in vitro testing of medical devices intended for long-term contact with the body, including those for cancer patients, using Jurkat T-cell leukemia line in RPMI 1640 medium, may lead to wrong predictions on their biocompatibility and potential antitumor activity.
461 _tМедицинская иммунология
463 _tТ. 23, № 3
_v[С. 593-604]
_d2021
510 1 _aSignificance of nutrient media choice for the long-term cultures of leukemic T-lymphoblasts
_zeng
610 1 _aэлектронный ресурс
610 1 _aтруды учёных ТПУ
610 1 _aRPMI1640
610 1 _aαMEM
610 1 _aJurkat T-клетки
610 1 _aжизнеспособность
610 1 _aсекреция
610 1 _aCell-IQ мониторинг
701 1 _aЛитвинова
_bЛ. С.
_gЛариса Сергеевна
701 1 _aЮрова
_bК. А.
_gКристина Аевксеевна
701 1 _aШуплецова
_bВ. В.
_gВалерия Владимировна
701 1 _aГазатова
_bН. Д.
_gНаталья Динисламовна
701 1 _aХазиахматова
_bО. Г.
_gОльга Геннадьевна
701 1 _aМалащенко
_bВ. В.
_gВладимир Владимирович
701 1 _aШунькин
_bЕ. О.
_gЕгор Олегович
701 1 _aТодосенко
_bН. М.
_gНаталья Михайловна
701 1 _aМелащенко
_bЕ. С.
_gЕлена Сергеевна
701 1 _aХлусова (Климова)
_bМ. Ю.
_gМарина Юрьевна
701 1 _aХлусов
_bИ. А.
_cбиофизик
_cпрофессор Томского политехнического университета, доктор медицинских наук
_f1963-
_gИгорь Альбертович
_2stltpush
_3(RuTPU)RU\TPU\pers\27874
712 0 2 _aНациональный исследовательский Томский политехнический университет
_bИсследовательская школа химических и биомедицинских технологий
_c(2017- )
_h8120
_2stltpush
_3(RuTPU)RU\TPU\col\23537
801 2 _aRU
_b63413507
_c20220519
_gRCR
856 4 0 _uhttps://doi.org/10.15789/1563-0625-SON-2142
942 _cBK